非洲馬瘟病毒RT-PCR試劑盒

African Horse Sickness Virus(AHSV)

產(chǎn)品及特點

非洲馬瘟病毒(African Horse Sickness Virus，AHSV)會引起非洲馬瘟，是 一種馬屬動物的急性或亞急性傳染病，該病以發(fā)熱、皮下結(jié)締組織與肺水腫以及 內(nèi)臟出血為特征，只能通過昆蟲傳播。馬對此病的易感性高，病死率高達 95%。 本病發(fā)生有明顯的季節(jié)性和地域性，多見于溫熱潮濕季節(jié)，常呈地方流行或暴發(fā) 流行，傳播迅速，因此靈敏快捷的診斷產(chǎn)品具有重要的意義。為此本公司開發(fā)了 本產(chǎn)品，可用于在科研領(lǐng)域快速定量檢測非洲馬瘟病毒。它具有下列特點：

1. 一站式，用戶不需要單獨準備每種成分，包括引物和對照。

2. 根據(jù)非洲馬瘟病毒的保守基因序列設(shè)計的引物，具有良好的特異性。

3. 靈敏度可以達到 1000 拷貝/反應(yīng)。

4. 使用一管式 RT-PCR 技術(shù)，RT 和 PCR 兩步在一個試管內(nèi)完成，不需要中間 轉(zhuǎn)移樣品，降低了操作誤差和可能的污染。

5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的 RT-PCR。

6. 本產(chǎn)品只能用于科研，不能用于臨床。

非洲馬瘟病毒RT-PCR試劑盒規(guī)格及成分

運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，保存期限為 12 個月。收到貨后陽性對照需要跟其他成分 分開放置，因為其容易污染其他成分，造成假陽性。 

自備試劑 樣品 DNA。

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 如果有 N 個樣品，必須設(shè)置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽性 對照），一個是 NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?10μL 非洲馬瘟病毒 PCR 陽性對照的 1000 倍稀釋液作為制備的陽性對照。可以用水作為制備的陰性 對照。制備所得成為樣品 RNA。

2. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 RNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 RNA 提 取試劑盒兼容。

二、設(shè)置 RT-PCR 反應(yīng)（20μL 體系）

3. 如果有 N+2 個樣品，則標記 N+4 個 PCR 管（額外增加的兩個管一個是 RT-PCR 陽性對照，另一個是 RT-PCR 陰性對照）并按照下表在 PCR 管中 加入下列成分： 

4. 上機進行 RT-PCR，RT-PCR 反應(yīng)參數(shù)為:

5. 瓊脂糖電泳檢測擴增效果。如果陰性對照有擴增產(chǎn)物或陽性對照無擴增產(chǎn)物， 則說明實驗失敗，需要分析實驗失敗的原因。只有在陰性對照沒有擴增產(chǎn)物、 陽性對照必須有預(yù)期條帶出現(xiàn)，才有必要分析樣品的實驗結(jié)果，如果有預(yù)期 片段大小的擴增產(chǎn)物則為陽性，如果無則為陰性。