滅鮭氣單胞菌PCR試劑盒

Aeromonas salmonicida

產(chǎn)品及特點(diǎn)

滅鮭氣單胞菌(Aeromonas salmonicida)是氣單胞菌屬(Aeromonas)細(xì) 菌的一個(gè)種，是引起鮭鱒魚類癤瘡病及潰瘍病的主要病原菌，給鮭科 (Salmonidae)魚類養(yǎng)殖帶來嚴(yán)重?fù)p失。近年來研究表明，該菌宿主范圍逐漸擴(kuò) 大，可感染除了鮭科外的其他水產(chǎn)動(dòng)物，如刺參、斑點(diǎn)叉尾鲙、烏鱧和大菱鲆 等。對(duì)滅鮭氣單胞菌的檢測(cè)主要依賴于傳統(tǒng)的微生物分離培養(yǎng)鑒定方法，其操 作過程費(fèi)時(shí)、繁瑣，且很難得到準(zhǔn)確結(jié)果，常常延誤病情的診斷，而且對(duì)于已 感染該菌但尚未發(fā)病的魚類，通過常規(guī)分離鑒定方法很難得到準(zhǔn)確結(jié)果本產(chǎn)品 是根據(jù) PCR 原理開發(fā)的滅鮭氣單胞菌檢測(cè)試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：

1. 即開即用，用戶只需要提供 DNA 模板。

2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強(qiáng)，只擴(kuò)增滅鮭氣單胞菌。

3. 提供陽性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

滅鮭氣單胞菌PCR試劑盒規(guī)格及成分

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對(duì)照需要單獨(dú)放置，不要污染其 他試劑。

自備試劑 樣品 DNA。

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 用自選方法純化 N+2 個(gè)樣品的 DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)核酸提取 試劑盒兼容。

2. 如果有 N 個(gè)樣品，則需要做 N+2 個(gè)提取，包括一個(gè)樣品制備陽性對(duì)照和一 個(gè)樣品制備陰性對(duì)照。樣品制備陽性對(duì)照是在適量水（取決于試劑盒要求 的樣品起始量）中加 10μL 滅鮭氣單胞菌 PCR 陽性對(duì)照的 10000 倍稀釋 液而得，樣品制備陰性對(duì)照是直接用水。提取結(jié)束后后得到模板 DNA 放 冰上待用。

二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40μL 體系）

3. 對(duì) N+2 個(gè)樣品，在 PCR 時(shí)需要增加一個(gè) PCR 陽性對(duì)照和一個(gè) PCR 陰性 對(duì)照，故需要設(shè)置 N+4 個(gè)反應(yīng)。在 N+4 個(gè) PCR 管中分別加入下列成分：

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)

三、電泳檢測(cè)

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測(cè) PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在 擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽 性對(duì)照必須有預(yù)期條帶出現(xiàn)，陰性對(duì)照必須無任何擴(kuò)增，否則實(shí)驗(yàn)無效。 對(duì)沒有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑 制劑的感染。